體積、電導、激光散射法(VCS)
這是Beckman-Coulter公司生產的血細胞分析儀所采用的經典分析方法,它集三種物理學檢測技術于一體,在細胞處于自然原始的狀態下對其進行多參數分析。該方法也稱為體積、電導、激光散射血細胞分析法。此技術采用在標本中首先加入紅細胞溶血劑溶解掉紅細胞,然后加入穩定劑來中和紅細胞溶解劑的作用,使白細胞表面、胞漿和細胞體積保持穩定不變。然后應用鞘流技術將細胞推進到流動細胞計數池(Flowcell)中,接受儀器VCS三種技術的檢測。
V代表體積(Volume)測量法,是采用經典的庫爾特zhuanli技術,用低頻電流準確分析細胞體積。體積是區分白細胞亞群的一個重要的參數,它可有效區分體積大小差異顯著的淋巴細胞和單核細胞。
C代表高頻電導性(Conductivity),采用高頻電磁探針原理測量細胞內部結構間的差異,也是該公司的zhuanli技術。細胞膜對高頻電流具有傳導性,當電流通過細胞時,細胞核的化學組份可使電流的傳導性產生變化,其變化量可以反映出細胞內含物的信息。該參數可用來區分體積相近而內部性質不同的細胞群體,如淋巴細胞和嗜堿性粒細胞,由于它們的細胞核特性不同而在傳導性參數上有所區別。
S代表激光散射(Scatter)測量技術,采用氦氖激光源發出的單色激光掃描每個細胞,收集細胞在10°~70°角度內出現的散射光 (MALS)信號。該激光束可穿透細胞,探測細胞內核分葉狀況和胞漿中的顆粒情況,提供有關細胞顆粒性的信息,可以區分出顆粒特性不同的細胞群體。例如細胞內顆粒粗的要比顆粒細的散射光更強,因此可以用于區分粒細胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜堿性三種細胞。
電阻抗、射頻與細胞化學聯合檢測技術
典型機型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等。這類儀器共有四個不同的檢測系統,將標本用特殊細胞染色技術處理后再應用RF和DC技術對白細胞進行分類和計數。其共采用如下四個檢測系統:
嗜酸性粒細胞檢測系統:該系統是利用電阻抗方式計數。血液經分血器分血后部分與嗜酸性粒細胞計數溶血劑混合,特異的溶血劑使嗜酸性粒細胞以外的所有細胞均溶解或萎縮,這種含完整嗜酸性粒細胞的液體經阻抗電路計數。
嗜堿性粒細胞系統:該系統檢測原理與嗜酸性粒細胞相同,不同的是其溶血劑只能保留血液中的嗜堿性粒細胞。
淋巴、單核、粒細胞(中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞)檢測系統:該系統采用電阻抗與射頻聯合檢測方式,使用作用較溫和的溶血劑,對核及細胞型態影響不大。在內外電極上存在直流和高頻兩個發射器。由于直流電不能達到細胞質及核質,而射頻電能透入胞內測量核大小和顆粒多少,因此這兩種不同的脈沖信號的個數及高低綜合反映了細胞數量、大?。―C)和核及顆粒密度(RF)。由于淋巴細胞、單核細胞及粒細胞的大小、細胞質含量、核形態與密度均有較大差異,故可通過掃描得出其比例。
幼稚細胞檢測系統:該系統也是利用電阻抗方式計數。其原理是由于幼稚細胞上的脂質較成熟細胞少,在細胞懸液中加入硫化氨基酸后,由于脂質占位不同,結合在幼稚細胞上的硫化氨基酸較成熟細胞多,且對溶血劑有抵抗作用,故能保持幼稚細胞的形態完整而溶解成熟細胞,即可通過阻抗法檢測。